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杨花的女人，名声扫地，于是，那些被玛丽镇压下去的苏格兰新教贵族决定向其发难。1567年6月，他们打着为达恩利公爵复仇的旗号起兵，向女王兴师问罪。玛丽兵败被囚，博斯韦尔伯爵则被流放到丹麦，还不到25岁的苏格兰女王从此结束了荣耀的王室生活。
伊丽莎白一直密切关注着苏格兰所发生的一切。她一方面希望维持与苏格兰的新教贵族的友谊，希望能影响苏格兰的对外政策，防止苏格兰被法国操纵。另一方面，她又不希望君主的尊严受到损害，希望新教贵族与玛丽能够达成妥协，她尤其反对新教贵族们处死玛丽。然而，就在伊丽莎白对玛丽感到左右为难之际，玛丽从监禁中逃跑了，而且跑到了英国，寻求伊丽莎白的保护。
玛丽来到英国，这使得英国的宗教形势一度紧张起来。英国北部的天主教势力蠢蠢欲动，想利用玛丽来反对伊丽莎白。玛丽没有明确表示承认《爱丁堡条约》，依然保留自己对英国王位的继承权，这就意味着在叛乱或者暗杀成立的前提下，英国将会再出现一个天主教女王。而苏格兰新教贵族们则希望伊丽莎白能驱逐玛丽，伊丽莎白的许多大臣也要求女王将玛丽�
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